Stable silver nanoparticles–aptamer bioconjugates for cellular prion protein imaging

Combining the unique optical properties of metal nanoparticles and the specific recognition of aptamer,aptamer–nanoparticle conjugates have been extensively used in a wide range of applications,particularly multifunctional nanoparticles for cell detection and molecular imaging.Conventional conjugates prepared by chemisorption of monothiol-modified oligonucleotides onto nanoparticle surfaces suffer from a lack of stability when exposed to a variety of small molecules.If silver is used in place of gold,then this lack of stability is even more pronounced.In this study,we reported here the effective and facile strategy of preparing stable silver nanoparticle–aptamer conjugates by in situ generation of strong metal affinity capping ligands,dithiocarbamates modified anti-prion protein aptamer.The conjugates produced are stable and can withstand NaCl concentration at0.25 mol/L.Meanwhile,they could be applied in the cellular prion protein imaging successfully.     

核糖体蛋白S3表达减少对果蝇发育的影响

为探讨核糖体蛋白S3在果蝇（Drosophila）发育中的作用,采用RNAi法,分别在果蝇和果蝇s2细胞中干扰核糖体蛋白S3表达,观察对果蝇表型的影响。结果显示,减少核糖体蛋白S3表达引起果蝇幼虫发育延迟,眼睛、翅膀和刚毛生长缺陷等。进一步实验表明,在翅原基中有明显的凋亡信号;S2细胞数目减少;细胞凋亡和细胞周期相关基因表达异常。上述结果暗示核糖体蛋白s3丧达减少导致的果蝇发育改变可能通过细胞凋亡的方式来实现。     

BMP2，BMP4及BMP信号通路相关成员在发情周期小鼠子宫中的表达

研究目的：研究骨形态发生蛋白（BMP）2,4及BMP信号通路相关成员在发情周期小鼠子宫中的表达模式。创新要点：运用实时荧光定量聚合酶链式反应（PCR）系统地研究了Bmp2和Bmp4及其BMP信号通路相关成员在小鼠子宫中mRNA水平表达模式,同时运用免疫组化方法研究了BMP2蛋白在小鼠子宫中的定位模式。研究方法：重要结论：收集发情周期各个时期小鼠子宫,一侧子宫角贮存于液氮或-80℃冰箱用于实时荧光定量PCR,另一侧子宫角用40mg／ml多聚甲醛固定用于BMP2蛋白免疫组化定位。实时荧光定量PCR结果表明,Bmp2的表达水平在发情前期显著高于发情期和发情后期（P〈0．05）,Bmp4的表达水平呈现显著波动,但Bmp2与Bmp4差异不显著（P〉0．05）。Bmprla和Bmpr2的表达水平在整个发情周期无显著变化（P〉0．05）。然而,Bmprlb的mRNA水平在发情期显著下降（P〈0．05）,在发情后期上升。此外,Bmprlb的mRNA水平显著低于相应时期Bmprla和Bmpr2的mRNA水平（P〈0．05）。三种R—Smads差异地表达于小鼠子宫,并且Smad1和Smad5的表达水平显著高于Smad8（P〈0．05）。此外,Smad4的表达水平在整个发情周期无显著变化。免疫组化结果显示,BMP2蛋白在整个发情周期差异表达,并主要定位于子宫腔上皮细胞和腺上皮细胞。我们的结果提供了BMP2和BMP4及其BMP信号通路相关成员mRNA水平表达变化信息,这些数据为论证BMP在子宫内膜中的作用如子宫内膜的退化与重塑提供量化和有用的信息。     

人RANKL胞外结构域原核表达载体的构建及表达条件优化

细胞核因子κB受体活化因子配体(Receptor activator of the NF-κB ligand,RANKL)是TNF超家族的重要成员之一,属于Ⅱ型跨膜蛋白,通过与其受体核因子κB受体活化因子(RANK)构建的信号通路参与乳腺癌的发生、肿瘤骨转移、骨质疏松、关节炎等病理过程。人RANKL胞外结构域基因片段与原核表达载体pET-21b融合并转化至表达菌Rosetta,并对其表达条件进行了优化。通过对诱导时机,诱导温度,异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)浓度,诱导时间及甘油浓度的条件优化表明,当IPTG的浓度为0.2 mmol/mL,20℃振荡诱导培养6 h时,甘油浓度为4%时,可在上清中获得高效表达的pET-21bRANKL融合蛋白,为该蛋白的进一步纯化及结构与功能研究打下了良好的基础。     

几种废啤酒酵母细胞破壁方法的比较

以废啤酒酵母为原料,根据实验室条件及试验要求,采用研磨法、冻融法、微波法、超声波法破碎废啤酒酵母细胞壁。利用紫外分光光度计测定上清液中可溶性蛋白质的含量为标准,来评价不同破壁方法对细胞内含物的释放程度。为进一步探索经济、高效的废啤酒酵母的破壁方法提供理论依据。结果表明,废啤酒酵母细胞破壁效果为超声波法﹥微波法﹥冻融法﹥研磨法。     

肺癌患者血清P53抗体及肺癌组织P53表达对肺癌诊断价值的研究

目的探讨肺癌患者血清P53抗体水平及肺癌组织P53表达对肺癌诊断的价值.方法采用ELISA法检测肺癌患者血清P53抗体水平,并采用免疫组化法检测肺癌组织P53表达情况.结果肺癌患者血清P53抗体（17.84±8.73）ng/L水平比正常对照组（5.43±1.90）ng/L显著升高（P〈0.001）,肺癌患者血清P53抗体水平与肿瘤大小、淋巴转移、远端转移、TNM分期有关.肺癌患者癌组织P53表达的阳性率为61.5%（168/273）,肺癌患者癌组织P53阳性表达率与肿瘤大小、淋巴转移、远端转移、TNM分期、分化程度、病理类型有关.结论血清P53抗体水平与癌组织中的表达有着良好的平行关系,测定血清P53抗体水平或检查肺癌患者癌组织P53的表达可对肺癌的诊断、分期、治疗和预后提供重要依据.     

水解度对蚕蛹蛋白酶解物的物化特性和抗氧化能力的影响

对蛋白质进行适度酶解是改善动植物蛋白原料的物化性质和提高其生理活性的常用方法.研究了水解度对蚕蛹蛋白的溶解性、乳化性、起泡性等物化性质的影响,以及水解度对蚕蛹蛋白的还原力,对DPPH自由基、超氧阴离子自由基和羟基自由基的清除能力等抗氧化特性的影响.实验结果表明,蚕蛹蛋白经适度酶解后溶解性得到显著改善,且水解度越大溶解性越好.蚕蛹蛋白经酶解后乳化性与乳化稳定性均降低,但起泡性和起泡稳定性增强,水解度增至5%时,起泡性和起泡稳定性达到最高值,继续增大水解度,反而下降.蚕蛹蛋白经酶解后抗氧化性显著提高,水解度为5%时,还原力和对DPPH自由基和羟基自由基的清除能力最高,水解度为15%时,对超氧阴离子自由基的清除能力最高,继续增加水解度,抗氧化能力反而下降.这说明,对蛋白质原料进行酶解改性时,不能简单的追求高水解度,而应根据产品的要求控制合适的水解度,过度水解是无益的.     

C-反应蛋白与冠状动脉粥样硬化相关性研究

目的研究C-反应蛋白与冠状动脉粥样硬化斑块的相关性.方法选择89例原发性高血压患者,应用B型超声测所有病例颈动脉内膜粥样斑块,用免疫学方法测定血液中C-反应蛋白浓度.分析斑块与C-反应蛋白浓度的关系.结果粥样斑块Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ级C-反应蛋白浓度高于粥样斑块0级(P<0.05).结论原发性高血压患者血液中C-反应蛋白浓度增高与颈动脉粥样硬化关系密切.     

幽门螺杆菌外膜蛋白与消化系疾病关系的研究

HP的全基因组序列显示,在其95个平行基因家族中存在着一个庞大的外膜蛋白(H.pylori outer membrane protein,Hop)家族,包含32种编码蛋白.这些外膜蛋白在幽门螺杆菌的诊断、保护性免疫和致病性等方面有着重要意义,与HP的定植、胃黏膜的损伤、炎性介质的分泌和中性粒细胞的浸润等有着密切的关系.     

拟南芥类结瘤素基因At1g01070的生物信息学分析

类结瘤素基因在非结瘤植物生长发育中承担着重要的功能,但仅少数基因的功能被鉴定.本研究对拟南芥类结瘤素MtN21(Medicago truncatula NODULIN 21)家族成员At1g01070进行了生物信息学分析及亚细胞定位验证.结果表明,At1g01070有两种可变剪切体,编码两种蛋白At1g01070.1和At1g01070.2,前者比后者在N端多47个氨基酸,它们的分子量分别为40KD和35KD,等电点分别为9.2和8.9;均含有2个MtN21蛋白的特征结构域EamA(药物/代谢物转运结构域),At1g01070.1比At1g01070.2多一个PLN00411结构域,且其靠近N端的EamA结构域较后者长;三级结构均由7个α-螺旋和一些不规则卷曲组成,分别含有10个和8个疏水跨膜区,均含13个磷酸化修饰位点,亚细胞定位预测主要定位在质膜;进化上,与琴叶拟南芥(Arabidopsis lyrata)亲缘关系最近;亚细胞定位结果显示At1g01070.1定位在质膜,与预测结果一致.推测At1g01070在植物体内可能参与物质运输.